最近涉及流式熒光的公司越發(fā)多了起來(lái)，相比于化學(xué)發(fā)光，它確實(shí)有自己獨特的優(yōu)勢，其中最主要的特點(diǎn)就是可以實(shí)現1人份試劑的多項目聯(lián)合檢測。比如對于自身免疫的項目，化學(xué)發(fā)光一般都是單孔單檢，流式熒光可以做到單孔多聯(lián)檢，也就是相同用量的血清，化學(xué)發(fā)光只檢測了一個(gè)項目，流式熒光卻檢出了幾個(gè)甚至幾十個(gè)的項目。

首先介紹一下最關(guān)鍵的磁珠。不同類(lèi)型的磁珠混在一起，儀器是怎么區分開(kāi)的呢？目前有以下幾種類(lèi)型：

1.靠磁珠的大小加以區分。

流式涉及兩個(gè)概念，FSC（前向散射光）和SSC（側向散射光）。從使用經(jīng)驗來(lái)看，顆粒越大的，FSC就越大；內部結構越復雜的，SSC就越大。怎么理解呢？比如對于FSC，磁珠的顆粒越大，磁珠的投影也就越大，對應的光圈也就越大。比如你用激光去照射一粒面粉和一粒大米，大米的外部光圈肯定會(huì )更大。對于SSC，我們可以想象一下，你用激光照射一堆透明的玻璃球，和照射一堆內部鑲嵌了小星星的玻璃球，肯定后者的側面散射光信號更強。

那好了，流式儀器一般會(huì )用激光照射并收集FSC和SSC，做二維坐標圖，根據圖像來(lái)分別不同的磁珠。但是有一個(gè)問(wèn)題，如果磁珠的制備工藝相似，那么它們的內部結構就類(lèi)似，導致SSC都普遍接近，最終起到區分作用的只有FSC這個(gè)指標。但是我們希望不同項目的磁珠粒徑盡量接近（4-6um），反應才比較均衡，所以?xún)H僅靠FSC和SSC來(lái)區分的磁珠，可用性很小。

2.摻入熒光素。

有的公司只摻入了一種熒光素，比如蘇州為度新開(kāi)發(fā)的流式磁珠，首先靠FSC區分4um和5um的兩個(gè)群體，然后每個(gè)群體又摻入了9個(gè)梯度的熒光素APC，最終做出了18重磁珠，這是一種開(kāi)發(fā)思路；但是我們上面講到了，磁珠的粒徑最好是一致的，所以像是深圳唯公的磁珠，就摻入了兩種熒光素，也就是磁珠的粒徑都一樣，靠的是兩種熒光素的摻入比例來(lái)進(jìn)行區分，這與luminex的開(kāi)發(fā)思路是一致的，這樣做出來(lái)的磁珠種類(lèi)更多，也更利于免疫檢測。

對于自身免疫和過(guò)敏原這種抗體檢測項目，一般都是采用的間接法。也就是磁珠標記抗原，檢測抗體為PE（藻紅蛋白）標記的抗人IgM或抗人IgG或抗人IgE等。

也許有人會(huì )問(wèn)，能不能采用捕獲法呢？標記抗人Ig抗體，然后用不同的蛋白標記PE來(lái)進(jìn)行檢測？這樣是不行的。雖然磁珠仍然可以分開(kāi)，但是它們都可以抓住不同類(lèi)型的Ig抗體，可以出現一陽(yáng)全陽(yáng)的局面，這顯然是不可行的。

對于雙抗夾心的項目，同樣是將標記抗體分別標記不同的磁珠，對于檢測抗體，一般有兩種操作：

一是將各個(gè)抗體分別標記PE，然后進(jìn)行混合；

二是將各個(gè)抗體分別標記Biotin，最終借助SA-PE進(jìn)行最終的檢測。

一的難點(diǎn)是抗體與PE的標記，這對于很多公司都是一個(gè)技術(shù)壁壘，感覺(jué)操作容易產(chǎn)生很大的批間差。

二的特點(diǎn)是生物素標記比較簡(jiǎn)單，但是因為借助了SA-PE，所以反應步驟會(huì )增加，反應時(shí)間會(huì )延長(cháng)，對于反應時(shí)間有要求的項目，則需要斟酌一下。

流式熒光與化學(xué)發(fā)光在研發(fā)上的區別？

不管是流式磁珠還是發(fā)光用的磁珠，目前大部分都還是羧基磁珠，所以在標記工藝方面來(lái)說(shuō)幾乎是一樣的，只不過(guò)在數量方面會(huì )有較大差別。流式磁珠在使用的時(shí)候一般按照個(gè)數計量（如1×10^5個(gè)/mL），發(fā)光磁珠則一般按照重量單位mg/mL進(jìn)行計量，所以發(fā)光的磁珠和抗體消耗是相對較大的。但是我們得相信，量的積累一定會(huì )保證質(zhì)的提升，所以發(fā)光試劑在準確度方面一般是優(yōu)于流式熒光的。

并且由于流式磁珠是逐個(gè)地去測試熒光值，每個(gè)磁珠的熒光值難免存在差異，熒光結果的報告也會(huì )有不同的形式，可以用平均值，也可以采用中位數，但是這個(gè)數據也是會(huì )隨著(zhù)圈圈的大小和位置不斷地變化。